Rt pcr là gì? Các công bố khoa học về Rt pcr
RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp di truyền phân tử được sử dụng để nhân đôi và phân tích một đoạn cụ thể của RNA tron...
RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp di truyền phân tử được sử dụng để nhân đôi và phân tích một đoạn cụ thể của RNA trong mẫu. Phương pháp này thường được sử dụng để phát hiện và xác định sự hiện diện của vi rút hoặc gen cụ thể trong mẫu sinh phẩm. RT-PCR được sử dụng rộng rãi trong lĩnh vực y học, chẩn đoán bệnh, nghiên cứu di truyền và nhiều lĩnh vực khác.
RT-PCR là một kỹ thuật phân tử sinh học được sử dụng để phát hiện và nhân bản các đoạn RNA cụ thể trong mẫu. Phương pháp này kết hợp giữa một bước đảo ngược transcripsion (reverse transcription) để chuyển đổi RNA thành DNA một một tên gọi khác là cDNA (complementary DNA) và sau đó sử dụng phương pháp polymerase chain reaction (PCR) để nhân bản DNA này.
Quá trình RT-PCR bao gồm các bước chính như sau:
1. Reverse Transcription (RT): Trước tiên, enzyme đảo ngược transcripsion (reverse transcriptase) được sử dụng để chuyển đổi RNA thành cDNA. Một đoạn oligonucleotide ngược (primer) được thêm vào để bắt đầu quá trình transcripsion. RT xảy ra trong một ống nhiệt độ đã được điều chỉnh để cung cấp các điều kiện lý tưởng cho reverse transcriptase hoạt động.
2. PCR: Sau khi cDNA được tạo ra, phương pháp PCR được sử dụng để nhân bản DNA nhằm tăng lượng đoạn DNA mong muốn lên. PCR bao gồm các chu kỳ nhiệt đới kéo dài, mỗi chu kỳ bao gồm các bước gia nhiệt để tách các một đúng nhân đôi (denaturation), một bước gia nhiệt để các primer được gắn vào mỗi sợi mẫu (annealing), và một bước gia nhiệt để enzyme polymerase sao chép đoạn DNA (extension). Quá trình tổng cộng này được lặp lại nhiều lần để tạo ra hàng triệu bản sao của DNA mục tiêu.
3. Phân tích kết quả: Khi quá trình PCR hoàn tất, sản phẩm nhân bản có thể được phân tích bằng cách sử dụng các phương pháp như gel điện phoresis, qPCR (quantitative PCR), sequencing, hoặc sử dụng các công cụ phân tích khác.
RT-PCR là một công cụ mạnh mẽ trong nghiên cứu gen và di truyền, y tế và chẩn đoán bệnh. Nó được sử dụng để phát hiện và xác định sự hiện diện của RNA từ một loại vi rút cụ thể, như vi rút SARS-CoV-2 gây ra COVID-19, hoặc để theo dõi mức độ biểu hiện gen trong mẫu sinh phẩm.
Danh sách công bố khoa học về chủ đề "rt pcr":
Trong bối cảnh dịch bùng phát liên tục của coronavirus mới xuất hiện gần đây (2019-nCoV), các phòng thí nghiệm y tế công cộng đang gặp phải thách thức do chưa có được các mẫu virus cách ly, trong khi ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy dịch bệnh lan rộng hơn so với dự đoán ban đầu và sự lây lan quốc tế qua khách du lịch đang xảy ra.
Chúng tôi đặt mục tiêu phát triển và triển khai một phương pháp chẩn đoán mạnh mẽ để sử dụng trong môi trường phòng thí nghiệm y tế công cộng mà không cần có sẵn mẫu virus thực tế.
Chúng tôi trình bày một quy trình chẩn đoán được xác thực cho 2019-nCoV, với thiết kế dựa trên quan hệ gen gần gũi của 2019-nCoV với coronavirus SARS, tận dụng công nghệ axit nucleic tổng hợp.
Quy trình này phát hiện chính xác 2019-nCoV và phân biệt 2019-nCoV với SARS-CoV. Thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập, chúng tôi đã xác nhận tính độc quyền của kết quả thử nghiệm dựa trên 297 mẫu lâm sàng gốc có chứa đầy đủ phổ virus đường hô hấp ở người. Vật liệu kiểm soát được cung cấp thông qua European Virus Archive – Global (EVAg), một dự án cơ sở hạ tầng của Liên minh Châu Âu.
Nghiên cứu hiện tại chứng minh năng lực phản ứng mạnh mẽ đạt được thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập trong các mạng lưới nghiên cứu quốc gia và châu Âu.
Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược (RT-PCR) là phương pháp nhạy nhất để phát hiện mRNA với số lượng thấp, thường thu được từ các mẫu mô hạn chế. Tuy nhiên, đây là một kỹ thuật phức tạp, có nhiều vấn đề đáng kể liên quan đến độ nhạy, tính tái sản xuất và tính đặc hiệu của nó, và với tư cách là một phương pháp định lượng, nó gặp phải những vấn đề vốn có trong PCR. Sự ra đời gần đây của các quy trình RT-PCR động học dựa trên huỳnh quang đã đơn giản hóa đáng kể quá trình tạo ra sự định lượng mRNA tái sản xuất và hứa hẹn sẽ khắc phục những hạn chế này. Tuy nhiên, việc áp dụng thành công của chúng phụ thuộc vào sự hiểu biết rõ ràng về các vấn đề thực tiễn, và thiết kế thí nghiệm, ứng dụng và xác thực cẩn thận vẫn là điều cần thiết để đo lường định lượng chính xác sự phiên mã. Bài đánh giá này thảo luận về các khía cạnh kỹ thuật liên quan, tương phản giữa các phương pháp RT-PCR thông thường và động học trong việc định lượng biểu hiện gen và so sánh các hệ thống RT-PCR động học khác nhau. Nó minh họa sự hữu ích của những xét nghiệm này bằng cách chứng minh sự khác biệt đáng kể về mức độ phiên mã giữa các cá thể trong họ gen housekeeping, dehydrogenase glyceraldehyde-3-phosphate (GAPDH).
Phương pháp PCR Ngược Dòng Thời gian Thực dựa trên huỳnh quang (RT-PCR) được sử dụng rộng rãi để định lượng mức mRNA ở trạng thái ổn định và là một công cụ quan trọng cho nghiên cứu cơ bản, y học phân tử và công nghệ sinh học. Các thử nghiệm dễ tiến hành, có khả năng xử lý khối lượng lớn, và có thể kết hợp độ nhạy cao với độ đặc hiệu đáng tin cậy. Công nghệ này đang tiến hóa nhanh chóng với sự xuất hiện của các enzym, hóa chất và thiết bị mới. Tuy nhiên, mặc dù RT-PCR thời gian thực đã giải quyết nhiều khó khăn vốn có trong RT-PCR thông thường, nó đã trở nên ngày càng rõ ràng rằng nó tạo ra những vấn đề mới cần giải quyết cấp thiết. Do đó, bên cạnh việc cung cấp bức tranh tổng thể về công nghệ RT-PCR thời gian thực, bài đánh giá này còn có mục tiêu bổ sung: sẽ mô tả và thảo luận cụ thể một số vấn đề liên quan đến việc giải thích các kết quả có tính chất số học và dễ dàng phân tích thống kê, nhưng độ chính xác của chúng bị ảnh hưởng đáng kể bởi sự biến đổi của hóa chất và người điều hành.
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 10